La purification de l`ARN naissant était basée sur le protocole nascent-Seq (khodor et al. 2011; Ferrari et al. 2013). Les cellules TC-797 et 1015 (2 × 106) ont été cultivées dans des plats de 100 mm. JQ1 a été ajouté au milieu à une concentration finale de 500 nM pour les cellules TC-797 ou 2 μM pour 1015 cellules. Brièvement, les cellules ont été récoltées et homogénéisées trois fois avec une aiguille de 25 guage dans 1 mL de tampon CSK (15 mM HEPES à pH 7,8, 100 mM NaCl, 3 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 500 mM saccharose, 0,5% Triton X-100, inhibiteur de protéase complète [Roche], 0,5 × SUPERaseIN [Life Technologies]) pour isoler les noyaux. Les noyaux ont été recueillis par centrifugation et remis en suspension dans 80 μL de tampon CF (tris 10 mM à pH 8,0, 100 mM NaCl, 25 mM EDTA, 1 × SUPERaseIN; Life Technologies). Immédiatement après, 1 ml de tampon Nun (1,5 M d`urée, 20 mm HEPES à pH 7,8, 300 mm NaCl, 7,5 mm MgCl2, 500 mm EDTA, 1% NP40) a été ajouté, et l`échantillon a été vortexés pour lyser les noyaux. Le mélange a été incubé sur de la glace avec agitation occasionnelle pendant 10 min pour permettre la précipitation de l`ADN génomique et des histones de base ainsi que l`ARN polymérase II et les transcriptions Nascentes. Après que l`échantillon a été filé 20, 000G pendant 10 min à 4 ° c, le culot a été lavé deux fois avec le tampon NUN.

Ensuite, le culot a été remis en suspension dans 700 μL de tampon CF supplémenté avec 1% de SDS et 1 mg/mL de protéinase K à l`aide d`une aiguille de 25 guage et incubé pendant 60 min à 55 ° c. Le lysat a été extrait avec du phénol/chloroforme. Les acides nucléiques ont été précipités, dissous dans H2O, et traités avec la Turbo DNase I (Ambion) pendant 60 min à 37 ° c pour éliminer la contamination de l`ADN. 50 nanogrammes d`ARN naissant ont été utilisés pour faire de la bibliothèque d`ARN pour Illumina en suivant les instructions fournies par le fabricant pour le kit de préparation de bibliothèque d`ARN ultra directionnel NEBNext (New England Biolabs). De Collectieve arbeidsovereenkomst op ondernemingsniveau is een handig instrument OM de arbeidsorganisatie of individuele de Collectieve Loon-en arbeidsvoorwaarden binnen een Onderneming aan te passagers aan de Economische en sociale realiteit, zonder dat Men ziet genoodzaakt ziet tot het sluiten van individuele overeenkomsten met Elke werknemer. Les ratios de SCD calculés ont été corrélés avec les concentrations de TG sériques (r = 0,48; P ≤ 0,0001) et HDL-C (r = − 0,42; P < 0,001) dans tous les régimes alimentaires (tableau 7). Le ratio SCD calculé n`a pas été corrélé avec la concentration sérique de TC ou de LDL-C.